Microscopía

Grupo Microscopía

Microscopía

 

Responsable: Dr. José Ángel Rodríguez Alfaro

E-mailjarodrigueza@sescam.jccm.es

 

Corresponsable: Dr. Javier Mazarío Torrijos

E-mailjmazario@sescam.jccm.es

 

Teléfono: 925 396 830

 

El Servicio de Microscopía y Análisis de Imagen (SMAI) es una instalación del Hospital Nacional de Parapléjicos, dependiente del SESCAM. Desde el SMAI se pone a disposición de los grupos de investigación del HNP, el equipamiento y la experiencia de su personal para la captura y análisis de imágenes de muestras biológicas y de materiales. Bajo determinadas condiciones, también puede ofrecer su soporte a otras instituciones públicas y empresas privadas del entorno.

 

El SMAI del HNP se creó en 2007 a raíz de la adquisición de un microscopio confocal Leica SP5. Desde entonces la capacidad del SMAI se ha ampliado y en la actualidad cuenta con una gran variedad de equipos de última generación como varios microscopios de epifluorescencia y de campo claro, dos microscopios invertidos para la captura de Video Time-Lapse, un microdisector láser, dos microscopios confocales, uno de ellos también equipado para trabajar con muestras vivas y un microscopio robotizado para estudios de High Content Screening, así como licencias para los programas informáticos comerciales de análisis de imagen NewCAST y Neurolucida.

 

En el SMAI se realiza de manera rutinaria adquisición de superimágenes de grandes áreas (campo claro y fluorescencia), captura de imágenes de fluorescencia en muestras teñidas con hasta 5 fluorocromos, estudios de migración celular, de colocalización, disección selectiva de regiones específicas de tejido para análisis de ARN o proteínas y procesamiento y análisis de imágenes digitales. Además el SMAI está equipado para realizar estudios de FRAP, FRET y estereología.
 

 
 

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NORMAS DEL SERVICIO DE MICROSCOPÍA Y ANÁLISIS DE IMAGEN

 

 

 

Pulse para solicitar servicios del SMAI

 

 

Equipos del servicio de Microscopía

 

ORDENADOR PARA ANÁLISIS DE IMAGEN

Ordenador HP ProDesk 400 G6 Micro torre 1 x Corei7 9700 / 3 GHz. RAM 32 GB.

Progamas informáticos para análisis de imagen:

- FIJI

- QuPath

- Olympus ScanR (con licencia para deconvolución 2D, 3D e inteligencia aritificial)

- Olympus CellSens Dimensions (con licencia para deconvolución 2D, 3D e inteligencia aritficial)

 

 

MICROSCOPIO CONFOCAL LEICA TCS SP5

microscopio_confocal_leica_tcs_sp5.jpgEl microscopio confocal Leica TCS SP5 está equipado con nueve líneas de excitación, cuatro canales de detección simultáneos (tres detectores para reflexión y/o fluorescencia y otro para luz transmitida) y un sistema AOBS (Acousto-Optical Beam Splitter)

Resolución: 200 nm

Láseres:

Diodo UV 405 nm

Argón multilineal 458, 476, 488, 496 y 514 nm

Helio-Neón 543 nm

Helio-Neón 594 nm

Helio-Neón 633 nm

Objetivos:

10x PH1; HC PL APO 20x/0.70 CS; HCX PL APO 40x/1.25-0.75 oil CS; HCX PL APO 63x/1.4-0.6 oil HCX; PL APO 63x/1.3 glicerol Corr CS

 

MICROSCOPIO CONFOCAL LEICA TCS SP5 DE ESCANEO RÁPIDO

microscopio_confocal_leica_tcs_sp5_de_escaneo_rapido.jpgEl microscopio confocal Leica TCS SP5 está equipado con ocho líneas de excitación, cuatro canales de detección simultáneos (tres detectores para reflexión y/o fluorescencia y otro para luz transmitida) y un sistema AOBS (Acousto-Optical Beam Splitter). Microscopio con platina totalmente motorizada que permite hacer fotografías en mosaico y grabar posiciones para escanear a diferentes tiempos. Este confocal está equipado con el módulo de escaneo rápido (resonant scanner), especialmente diseñado para captación in vivo y estudios de dinámica a elevada velocidad.

Resolución: 200 nm

Láseres:

Diodo UV 405 nm

DPSS 561 nm

Helio-Neón 633 nm

Láser blanco (supercontinuo). Sintonizable entre 470 y 670 nm

Objetivos:

FL PLAN 5x/0.12; PL APO 10x/0.4; PL APO 20x/0.70 CS; PL APO 40x/1.25-0.75 oil CS; PL APO 63x/1.4-0.6 oil CS; PL APO 63x/1.3 glicerol Corr CS

 

MICRODISECTOR LÁSER LEICA LMD 6000

microdisector_laser_leica_lmd_6000.jpgEl LMD 6000 es un sistema de microdisección compuesto por un microscopio Leica completamente automatizado acoplado a un láser de diodo UV de estado sólido a 355 nm de alta potencia y con un sistema de recogida de muestras por gravedad que evita el uso de fuerzas adicionales que puedan dañar la muestras diseccionadas.

Permite la disección de especímenes o tejidos microscópicos para aislar fragmentos homogéneos y más pequeños de la muestra para su posterior análisis o cultivo (en el caso de muestras vivas).

Equipado con iluminación de fluorescencia y filtros para DAPI, FITC y TEXAS RED

Objetivos: PL FLUO 1.25x/0.04; UVI MICRODIS 6.3x/0.3; PL FLUO 20x/0.4; PL FLUO 40x/0.6 air; PL FLUO 63x/0.7 air.

 

MICROSCOPIO INVERTIDO OLYMPUS IX83 PARA HIGH CONTENT ANALYSIS Y MOSAICOS DE IMÁGENES DE GRANDES ÁREAS

El microscopio IX83 está completamente motorizado y equipado con una fuente de iluminación LED para fluorescencia de 7 canales que cubren el rango del ultravioleta al infrarrojo. También cuenta con 6 filtros de emisión en una rueda rápida de filtros. La combinación de las líneas de excitación y los filtros de emisión permite emplear una gran variedad de marcadores fluorescentes que se pueden muestrear a gran velocidad. Las imágenes se adquieren con una cámara Hamamatsu Orca 4.0.

El software ScanR convierte este equipo en una plataforma de high content analysis permitiendo realizar múltiples fotografías a diferentes longitudes de onda en placas de cultivo de 6 a 384 pocillos y en portas de forma rápida y automática y, de manera simultánea, el análisis de estas imágenes.

Con el software CellSens Dimensions podemos capturar automáticamente mosaicos de imágenes de grandes áreas a alta resolución hasta en 4 portas de manera simultánea.

Ambos paquetes informáticos cuentan con licencias para deconvolución 2D, 3D y análisis de imagen por inteligencia artificial de última generación.

 

Filtros: Amplia gama de filtros que permiten la visualización de los marcadores fluorescentes habituales en investigación.

Objetivos: UPLXAPO4X/0.16, UPLXAPO10X/0.40, UPLXAPO20X/0.80, UPLXAPO40X/0.95, UPLXAPO40XO/1.40, UPLXAPO60XO/1.42, LUCPLFLN20XPH/0.45, LUCPLFLN40XPH/0.60

 

MICROSCOPIO DE EPIFLUORESCENCIA DM5000B LEICA

microscopio_de_epifluorescencia_dm5000b_leica.jpgEs un microscopio especialmente pensado para técnicas de fluorescencia, aunque también se pueden observar con técnicas de luz transmitida (campo claro y contraste de fase). Está equipado con una cámara digital monocroma de ultra alta sensibilidad Leica DFC 350 FX.

Objetivos: FL PLAN 5x; HCX PL S-APO 10x/0.30; HCX PL S-APO FLUOTAR 20x/0.50; HCX PL APO 40x/0.85 CORR; HCX PL APO 100x/1.40-0.70 oil.

Filtros disponibles: Amplia gama de filtros que permiten la visualización de los marcadores fluorescentes habituales en investigación.

 

MICROSCOPIO DMI6000B PARA CÉLULA VIVA (VTL)

microscopio_dmi6000b_para_celula_viva_vtl.jpgMicroscopio automático e invertido con platina motorizada y preparado para experimentos de célula viva (video time-lapse). Puede realizar capturas con luz transmitida (campo claro, contraste de fases y campo oscuro) y con fluorescencia de luz incidente. Está equipado con una cámara digital monocroma de ultra alta Sensibilidad Leica DFC 350 FX..

Objetivos: N PLAN 5x/0.12; HC PL FLUOTAR 10x/0.30 PH; HCX PL FLUOTAR 20x/0.40 CORR PH; HCX PL FLUOTAR 40x/0.60 CORR PH 2 XT

Filtros disponibles: Amplia gama de filtros que permiten la visualización de los marcadores fluorescentes habituales en investigación.

 

MICROSCOPIO INVERTIDO IX81 OLYMPUS PARA CÉLULA VIVA

microscopio_invertido_ix81_olympus_para_celula_viva.jpgMicroscopio automático e invertido con platina motorizada y preparado para experimentos de célula viva (video time-lapse). Puede realizar capturas con luz transmitida (campo claro, contraste de fase y campo oscuro) y con fluorescencia de luz incidente. Esta equipado con una CCD monocroma de alta sensibilidad de Hamamatshu (ORCA-ER)

Objetivos: Plan 4x/0.10; UPlanFL N 10x/0.3; LUCPlanFL N 20x/0.45; LUCPlan FL N 40x/0.6; PlanApo 60x/1.42 oil.

Filtros: DAPI, FITC, Texas Red.

 

MICROSCOPIO OLYMPUS BX61 PARA ESTEREOLOGÍA Y MAPEO ANATÓMICO

microscopio_olympus_bx61_para_estereologia_y_mapeo_anatomico.jpgMicroscopio con platina y enfoque motorizados. Está equipado con una cámara digital a color refrigerada de 12 bits y 12,5 megapíxeles Olympus DP71 y una cámara a color MBF CX9000. El sistema cuenta con una licencia para el programa informático para estudios de estereología newCAST y con otra licencia para el programa informático Neurolucida de mapeo anatómico y trazado de neuronas.

Objetivos: PlanApo N 2x/0.08; UPlanSapo 4x/0.16; Plan N 10x/0.25; UPlanSapo 20x/0.75; UPlanSApo 40x/0.95; UPlanSApo 100x/1.40 oil.

 

LUPA MULTIZOOM AZ100 NIKON DE FLUORESCENCIA

lupa_multizoom_az100_nikon_de_fluorescencia.jpgEl microscopio AZ100 combina las ventajas de un microscopio estereoscópico o lupa (con gran campo visual y largas distancias de trabajo) y las de un microscopio tradicional permitiendo la obtención de imágenes macro y micro de alta resolución. Acoplada a la lupa tenemos una CCD de alta resolución en color DS-RI1 de Nikon.

Esta lupa es muy útil para fotos de magnificación media, como sería la comprobación de transgénicos, cortes histológicos y cultivos

Zoom: 10x-400x

Objetivos: AZ-Plan Apo 1x, AZ-Plan Fluor 2x N. 0.2 WD 45 y AZ-Plan Fluor 5x NA 0.5 WD 15 todos de larga distancia focal.

Factor de zoom de la vía óptica; de 1x a 8x en continuo con un mecanismo de parada en cada uno de los niveles de zoom (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, y 8) para que los aumentos puedan ser repetitivos.

Oculares; 10x,

Técnicas de iluminación: La lupa está equipada con una fuente de luz de mercurio para iluminación de fluorescencia y un revólver con los diferentes filtros; DAPI, CFP, FITC o GFP, Cy3 o TRITC y Texas Red. Además cuenta con gran cantidad de opciones de iluminación con luz transmitida (campo claro, luz polarizada, luz oblicua y DIC).

 

OTROS EQUIPOS

otros_equipos.jpg* Ultramicrotomo Leica EM UC6.

Equipo para realizar cortes ultrafinos de muestras biológicas o industriales para su posterior observación al microscopio electrónico. Está totalmente motorizado y preparado para utilizar cuchillas tanto de vidrio como de diamante.

* Microtomo de deslizamiento Microm HM 450 con unidad de congelación.