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Microscopía
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Responsables: Dr. José Ángel Rodríguez Alfaro y Dr. Javier Mazarío Torrijos
Teléfono: 925 39 68 30
E-mail: microscopia.hnp@sescam.jccm.es
El Servicio de Microscopía y Análisis de Imagen (SMAI) es una instalación del Hospital Nacional de Parapléjicos, dependiente del SESCAM. Desde el SMAI se pone a disposición de los grupos de investigación del HNP, el equipamiento y la experiencia de su personal para la captura y análisis de imágenes de muestras biológicas y de materiales. Bajo determinadas condiciones, también puede ofrecer su soporte a otras instituciones públicas y empresas privadas del entorno.
El SMAI del HNP se creó en 2007 a raíz de la adquisición de un microscopio confocal Leica SP5. Desde entonces la capacidad del SMAI se ha ampliado y en la actualidad cuenta con una gran variedad de equipos de última generación como varios microscopios de epifluorescencia y de campo claro, dos microscopios invertidos para la captura de Video Time-Lapse, un microdisector láser, dos microscopios confocales, uno de ellos también equipado para trabajar con muestras vivas y un microscopio robotizado para estudios de High Content Screening, así como licencias para los programas informáticos comerciales de análisis de imagen NewCAST y Neurolucida.
En el SMAI se realiza de manera rutinaria adquisición de superimágenes de grandes áreas (campo claro y fluorescencia), captura de imágenes de fluorescencia en muestras teñidas con hasta 5 fluorocromos, estudios de migración celular, de colocalización, disección selectiva de regiones específicas de tejido para análisis de ARN o proteínas y procesamiento y análisis de imágenes digitales. Además el SMAI está equipado para realizar estudios de FRAP, FRET y estereología.
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NORMAS DEL SERVICIO DE MICROSCOPÍA Y ANÁLISIS DE IMAGEN
Equipos del servicio de Microscopía
ORDENADOR PARA ANÁLISIS DE IMAGEN
Ordenador HP ProDesk 400 G6 Micro torre 1 x Corei7 9700 / 3 GHz. RAM 32 GB.
Progamas informáticos para análisis de imagen:
- FIJI
- QuPath
- Olympus ScanR (con licencia para deconvolución 2D, 3D e inteligencia aritificial)
- Olympus CellSens Dimensions (con licencia para deconvolución 2D, 3D e inteligencia aritficial)
MICROSCOPIO CONFOCAL LEICA TCS SP5
El microscopio confocal Leica TCS SP5 está equipado con nueve líneas de excitación, cuatro canales de detección simultáneos (tres detectores para reflexión y/o fluorescencia y otro para luz transmitida) y un sistema AOBS (Acousto-Optical Beam Splitter)
Resolución: 200 nm
Láseres:
Diodo UV 405 nm
Argón multilineal 458, 476, 488, 496 y 514 nm
Helio-Neón 543 nm
Helio-Neón 594 nm
Helio-Neón 633 nm
Objetivos:
10x PH1; HC PL APO 20x/0.70 CS; HCX PL APO 40x/1.25-0.75 oil CS; HCX PL APO 63x/1.4-0.6 oil HCX; PL APO 63x/1.3 glicerol Corr CS
MICROSCOPIO CONFOCAL LEICA TCS SP5 DE ESCANEO RÁPIDO
El microscopio confocal Leica TCS SP5 está equipado con ocho líneas de excitación, cuatro canales de detección simultáneos (tres detectores para reflexión y/o fluorescencia y otro para luz transmitida) y un sistema AOBS (Acousto-Optical Beam Splitter). Microscopio con platina totalmente motorizada que permite hacer fotografías en mosaico y grabar posiciones para escanear a diferentes tiempos. Este confocal está equipado con el módulo de escaneo rápido (resonant scanner), especialmente diseñado para captación in vivo y estudios de dinámica a elevada velocidad.
Resolución: 200 nm
Láseres:
Diodo UV 405 nm
DPSS 561 nm
Helio-Neón 633 nm
Láser blanco (supercontinuo). Sintonizable entre 470 y 670 nm
Objetivos:
FL PLAN 5x/0.12; PL APO 10x/0.4; PL APO 20x/0.70 CS; PL APO 40x/1.25-0.75 oil CS; PL APO 63x/1.4-0.6 oil CS; PL APO 63x/1.3 glicerol Corr CS
MICRODISECTOR LÁSER LEICA LMD 6000
El LMD 6000 es un sistema de microdisección compuesto por un microscopio Leica completamente automatizado acoplado a un láser de diodo UV de estado sólido a 355 nm de alta potencia y con un sistema de recogida de muestras por gravedad que evita el uso de fuerzas adicionales que puedan dañar la muestras diseccionadas.
Permite la disección de especímenes o tejidos microscópicos para aislar fragmentos homogéneos y más pequeños de la muestra para su posterior análisis o cultivo (en el caso de muestras vivas).
Equipado con iluminación de fluorescencia y filtros para DAPI, FITC y TEXAS RED
Objetivos: PL FLUO 1.25x/0.04; UVI MICRODIS 6.3x/0.3; PL FLUO 20x/0.4; PL FLUO 40x/0.6 air; PL FLUO 63x/0.7 air.
MICROSCOPIO INVERTIDO OLYMPUS IX83 PARA HIGH CONTENT ANALYSIS Y MOSAICOS DE IMÁGENES DE GRANDES ÁREAS
El microscopio IX83 está completamente motorizado y equipado con una fuente de iluminación LED para fluorescencia de 7 canales que cubren el rango del ultravioleta al infrarrojo. También cuenta con 6 filtros de emisión en una rueda rápida de filtros. La combinación de las líneas de excitación y los filtros de emisión permite emplear una gran variedad de marcadores fluorescentes que se pueden muestrear a gran velocidad. Las imágenes se adquieren con una cámara Hamamatsu Orca 4.0.
El software ScanR convierte este equipo en una plataforma de high content analysis permitiendo realizar múltiples fotografías a diferentes longitudes de onda en placas de cultivo de 6 a 384 pocillos y en portas de forma rápida y automática y, de manera simultánea, el análisis de estas imágenes.
Con el software CellSens Dimensions podemos capturar automáticamente mosaicos de imágenes de grandes áreas a alta resolución hasta en 4 portas de manera simultánea.
Ambos paquetes informáticos cuentan con licencias para deconvolución 2D, 3D y análisis de imagen por inteligencia artificial de última generación.
Filtros: Amplia gama de filtros que permiten la visualización de los marcadores fluorescentes habituales en investigación.
Objetivos: UPLXAPO4X/0.16, UPLXAPO10X/0.40, UPLXAPO20X/0.80, UPLXAPO40X/0.95, UPLXAPO40XO/1.40, UPLXAPO60XO/1.42, LUCPLFLN20XPH/0.45, LUCPLFLN40XPH/0.60
MICROSCOPIO DE EPIFLUORESCENCIA DM5000B LEICA
Es un microscopio especialmente pensado para técnicas de fluorescencia, aunque también se pueden observar con técnicas de luz transmitida (campo claro y contraste de fase). Está equipado con una cámara digital monocroma de ultra alta sensibilidad Leica DFC 350 FX.
Objetivos: FL PLAN 5x; HCX PL S-APO 10x/0.30; HCX PL S-APO FLUOTAR 20x/0.50; HCX PL APO 40x/0.85 CORR; HCX PL APO 100x/1.40-0.70 oil.
Filtros disponibles: Amplia gama de filtros que permiten la visualización de los marcadores fluorescentes habituales en investigación.
MICROSCOPIO DMI6000B PARA CÉLULA VIVA (VTL)
Microscopio automático e invertido con platina motorizada y preparado para experimentos de célula viva (video time-lapse). Puede realizar capturas con luz transmitida (campo claro, contraste de fases y campo oscuro) y con fluorescencia de luz incidente. Está equipado con una cámara digital monocroma de ultra alta Sensibilidad Leica DFC 350 FX..
Objetivos: N PLAN 5x/0.12; HC PL FLUOTAR 10x/0.30 PH; HCX PL FLUOTAR 20x/0.40 CORR PH; HCX PL FLUOTAR 40x/0.60 CORR PH 2 XT
Filtros disponibles: Amplia gama de filtros que permiten la visualización de los marcadores fluorescentes habituales en investigación.
MICROSCOPIO INVERTIDO IX81 OLYMPUS PARA CÉLULA VIVA
Microscopio automático e invertido con platina motorizada y preparado para experimentos de célula viva (video time-lapse). Puede realizar capturas con luz transmitida (campo claro, contraste de fase y campo oscuro) y con fluorescencia de luz incidente. Esta equipado con una CCD monocroma de alta sensibilidad de Hamamatshu (ORCA-ER)
Objetivos: Plan 4x/0.10; UPlanFL N 10x/0.3; LUCPlanFL N 20x/0.45; LUCPlan FL N 40x/0.6; PlanApo 60x/1.42 oil.
Filtros: DAPI, FITC, Texas Red.
MICROSCOPIO OLYMPUS BX61 PARA ESTEREOLOGÍA Y MAPEO ANATÓMICO
Microscopio con platina y enfoque motorizados. Está equipado con una cámara digital a color refrigerada de 12 bits y 12,5 megapíxeles Olympus DP71 y una cámara a color MBF CX9000. El sistema cuenta con una licencia para el programa informático para estudios de estereología newCAST y con otra licencia para el programa informático Neurolucida de mapeo anatómico y trazado de neuronas.
Objetivos: PlanApo N 2x/0.08; UPlanSapo 4x/0.16; Plan N 10x/0.25; UPlanSapo 20x/0.75; UPlanSApo 40x/0.95; UPlanSApo 100x/1.40 oil.
LUPA MULTIZOOM AZ100 NIKON DE FLUORESCENCIA
El microscopio AZ100 combina las ventajas de un microscopio estereoscópico o lupa (con gran campo visual y largas distancias de trabajo) y las de un microscopio tradicional permitiendo la obtención de imágenes macro y micro de alta resolución. Acoplada a la lupa tenemos una CCD de alta resolución en color DS-RI1 de Nikon.
Esta lupa es muy útil para fotos de magnificación media, como sería la comprobación de transgénicos, cortes histológicos y cultivos
Zoom: 10x-400x
Objetivos: AZ-Plan Apo 1x, AZ-Plan Fluor 2x N. 0.2 WD 45 y AZ-Plan Fluor 5x NA 0.5 WD 15 todos de larga distancia focal.
Factor de zoom de la vía óptica; de 1x a 8x en continuo con un mecanismo de parada en cada uno de los niveles de zoom (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, y 8) para que los aumentos puedan ser repetitivos.
Oculares; 10x,
Técnicas de iluminación: La lupa está equipada con una fuente de luz de mercurio para iluminación de fluorescencia y un revólver con los diferentes filtros; DAPI, CFP, FITC o GFP, Cy3 o TRITC y Texas Red. Además cuenta con gran cantidad de opciones de iluminación con luz transmitida (campo claro, luz polarizada, luz oblicua y DIC).
OTROS EQUIPOS
* Ultramicrotomo Leica EM UC6.
Equipo para realizar cortes ultrafinos de muestras biológicas o industriales para su posterior observación al microscopio electrónico. Está totalmente motorizado y preparado para utilizar cuchillas tanto de vidrio como de diamante.
* Microtomo de deslizamiento Microm HM 450 con unidad de congelación.